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¿Como debe ser un isotipo?

¿Como debe ser un isotipo?

Fluorescencia menos uno

La selección del control de isotipo adecuado puede ser un elemento importante en los experimentos de citometría de flujo. Los anticuerpos de control de isotipo no tienen especificidad para una célula diana, pero conservan todas las características on-específicas de los anticuerpos utilizados en un experimento.

Recuerde que ningún control de isotipo es perfecto para todos los anticuerpos. En eBioscience intentamos minimizar las inconsistencias diseñando nuestros anticuerpos de control de isotipo conjugados con fluorocromo dentro de un rango estándar de fluoróforo:proteína (relación F/P) que es similar a nuestros anticuerpos primarios.

Los controles de isotipo son un buen punto de partida para optimizar los ajustes del citómetro de flujo y establecer un rango de datos para la autofluorescencia general de una célula marcada con un anticuerpo conjugado. Típicamente, uno esperaría que un anticuerpo de control de isotipo mostrara niveles bajos de tinción en una población celular particular, (es decir, poco cambio sobre la autofluorescencia), pero muchas veces el control de isotipo no funciona como se espera en un experimento de tinción intracelular, con niveles extremadamente bajos o altos de fluorescencia no específica.

Fmo vs control de isotipo

Los controles de isotipo son útiles para discriminar la señal del ruido en los experimentos de citometría de flujo. Los anticuerpos de control de isotipo no son específicos para ningún antígeno de la célula diana y representan los niveles de fondo de la fluorescencia no específica asociada a las células después de haber sido teñidas con anticuerpos conjugados con fluorocromos.

Tonbo Biosciences ofrece ahora anticuerpos de control de isotipo conjugados con todos nuestros fluorocromos, así como nuestro formato In Vivo Ready™ sin azida/bajo en endotoxinas para sus experimentos con animales y protocolos de estimulación in vitro.

Wiki de control de isotipos

Un control monoclonal de isotipo es un anticuerpo de control negativo de la misma especie, clase de inmunoglobulina, subclase y cadena ligera que el anticuerpo primario utilizado en una aplicación científica concreta. El control de isotipo se utiliza para diferenciar una señal o resultado positivo sobre el ruido de fondo u otras interacciones no específicas, como se observa en ensayos o estudios funcionales in vivo. Los anticuerpos de control de isotipo se desarrollan como los anticuerpos monoclonales específicos, pero los inmunógenos utilizados no están relacionados con proteínas similares o epítopos presentes en el organismo o especie objetivo, para asegurar que no haya interacciones específicas entre anticuerpo y antígeno.

Cuando se utilizan anticuerpos monoclonales en aplicaciones como estudios funcionales in vivo en animales preclínicos, o ensayos in vitro como citometría de flujo, inmunohistoquímica, inmunocitoquímica fluorescente, western blotting, ELISA o Luminex, se recomienda encarecidamente utilizar el anticuerpo de control de isotipo apropiado para generar datos fiables. Los anticuerpos monoclonales primarios pueden interactuar tanto específica como inespecíficamente con los receptores Fc de las células, las proteínas de la sangre, las proteínas celulares, los hidratos de carbono, los lípidos y los tejidos, provocando señales de tinción de fondo. La señal no específica del anticuerpo de control del isotipo, utilizado a la misma concentración o dosis que el anticuerpo específico, se utiliza para diferenciar una señal positiva o un resultado generado por el anticuerpo monoclonal específico.

Controles de citometría de flujo

Un buen diseño experimental es la clave para el desarrollo de fármacos precisos y exactos. Los anticuerpos de control del isotipo, diseñados e implementados adecuadamente, optimizan el rendimiento del estudio y el análisis de datos en la investigación de anticuerpos terapéuticos.

Los anticuerpos de control del isotipo son controles negativos utilizados para medir con precisión los efectos y la eficacia de los anticuerpos en los estudios de anticuerpos monoclonales (mAb) in vitro e in vivo. Los controles de isotipo coinciden con las características del anticuerpo de prueba/primario, pero se crían contra antígenos que no se encuentran en las especies preclínicas comunes; esto significa que los controles de isotipo carecen de especificidad para el antígeno objetivo.

En general, los anticuerpos son muy similares entre sí desde el punto de vista estructural. La mayor parte de una molécula de anticuerpo es la «región constante», donde los anticuerpos del mismo isotipo comparten secuencias de aminoácidos. Esta región constante ayuda a mediar el mecanismo de acción (MOA) del anticuerpo a través de la unión a los FcR. Sólo una pequeña región hipervariable del mAb determina realmente la unión específica al antígeno y el efecto terapéutico previsto.

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